EMSA
- 核918博天堂提取
- 验证型EMSA
- 竞争型EMSA
- 超迁徙EMSA
- RNA/DNA团结918博天堂
效劳特色
金开瑞提供EMSA检测手艺效劳 ，资助您检测DNA团结918博天堂、RNA团结918博天堂、特定的918博天堂质 。
效劳先容
凝胶迁徙或电泳迁徙率检测（Electrophoretic Mobility Shift Assay ，EMSA）是一种检测918博天堂质和DNA序列相互团结的手艺 ，可用于定性和定量剖析 。现在已用于研究DNA团结918博天堂和特定的DNA序列的相互作用 ，是转录因子研究的经典要领 。
验证型EMSA
?于验证探针是否含有可与蛋?质团结的位点 。将团结位点突变 ，以突变探针为比照 ，野?型探针泛起迁徙条带 ，?突变探针未泛起迁徙条带 ，则说明该探针含有可与蛋?质团结的位点 。
竞争型EMSA
探针序列稳固 ，不含修饰基团的探针称为冷探针 。冷探针与标记探针竞争性地与蛋?团结 ，冷探针不显影出迁徙条带 。以冷探针为比照 ，标记探针泛起迁徙条带 ，?冷探针迁徙条带削弱或消逝 ，则扫除了假阳性?扰 ，增添实验效果准确性 。
超迁徙EMSA
使??标蛋?的特异性抗体 ，蛋?-探针复合物被抗体识别并团结 ，该三聚复合物在凝胶电泳中 ，迁徙速率再次增? ，泛起在蛋?-探针复合物的上?的超迁徙条带 ，验证了探针与?的蛋?的特异性团结 。
效劳优势
- 直接测定918博天堂质与核酸的相互作用 ，提供定性和定量信息 。
- 可用于研究多种类型的相互作用 ，如特异性团结、非特异性团结、序列特异性等 。
- 手艺简朴 ，实验操作相对容易 。
- 可以使用差别的标记要领和检测手艺举行顺应差别实验需求 。
效劳流程
客户提供
需提取核918博天堂的细胞＞10^7 ，动物组织不少于400 mg ，植物组织不少于2 g ，建议客户在金开瑞表达重组918博天堂；
探针序列；
如使用团结918博天堂特异性抗体 ，抗体50 μL以上 ，浓度大于0.5 mg/mL 。
效劳说明
特殊说明：
? EMSA亦可?于研究RNA团结蛋?和其相关RNA序列的相互作?
? 如需要做超迁徙 ，需提供IP级别的抗体
? EMSA与酵?单杂交 ，可配合验证同?个问题
| 效劳名称 | 效劳内容 | 交付内容及标准 | 效劳周期(事情日) |
| DNA探针标记 | 探针标记及合成 (≤59bp) | 探针退火最少1次 (1组探针退火1次) | 7-10 |
| 探针标记及合成 (60bp-300bp) | 918博天堂孵育最少1次 | 12-16 | |
| RNA探针标记 | 探针标记及合成 (＜60bp) | 探针标记 | 7-10 |
| EMSA | EMSA | 10个泳道（包括阴性和阳性比照） | 10 |
案例展示
常见问题与剖析 (Q&A)
凝胶迁徙或电泳迁徙率检测（Electrophoretic Mobility Shift Assay ，EMSA）是一种检测918博天堂质和DNA序列相互团结的手艺 ，可用于定性和定量剖析；现在已用于研究RNA团结918博天堂和特定的RNA序列的相互作用 ，是转录因子研究的经典要领 。 金开瑞提供EMSA检测手艺效劳 ，资助您检测DNA团结918博天堂、RNA团结918博天堂、特定的918博天堂质 ，并可举行未知918博天堂的判断 。
当客户用组织或细胞核918博天堂举行实验时 ，无法确定与探针团结的详细918博天堂 ，需要再提供要研究的抗体 ，再举行supershift实验 。若是抗体能识别与探针团结的918博天堂 ，则会泛起一条超迁徙条带 ，即可证实探针与918博天堂的团结 。需客户提供IP级别的抗体 。
使用自然组织细胞样本举行实验 ，通过抽提核918博天堂获取目的918博天堂 ，此为混淆918博天堂 ，如要确定某个918博天堂团结于探针时 ，需要加入抗体视察是否形成超迁徙条带 ？梢酝ü刈918博天堂表达系统（如金开瑞的大肠、酵母、哺乳、无细胞等）获得特定的重组918博天堂 ，后续实验中如泛起迁徙条带 ，则应源于该918博天堂的结相助用 。
除了探针序列具有理论展望性、自己属于探索性实验的情形之外 ，组织细胞中该转录因子品貌较低、只在特定条件阶段表达 ，特定918博天堂同DNA团结需要一定的离子或辅助因子条件（如Mg2+、Zn2+、ATP） ，重组表达918博天堂在DNA团结活性方面同自然918博天堂保存差别 ，结协力较弱 ，需要其他918博天堂间接作用于DNA等情形下 ，都难以获得迁徙条带 。别的 ，当研究的918博天堂自己pI较大（如大于8.0） ，918博天堂在native电泳中将难以随同DNA一起向阳极泳动 ，或在电泳最初阶段同DNA解脱离 。
相关手艺效劳
| ? 修饰/标记引物 | ? 双荧光素酶报告系统 | ? 酵母单杂交 |
| ? CO-IP | ? RNA pull-down | ? RIP-qPCR |
| ? DNA pull-down | ? ChIP-qPCR | ? 酵母单杂交 |
| ? CUT&Tag | ||
相关资源
1、EMSA的实验办法
? 准备918博天堂质和核酸：获得目的918博天堂质和响应的DNA或RNA探针 。918博天堂质可以是纯化的重组918博天堂质或细胞提取物 。
? 准备核酸标记：对DNA或RNA探针举行标记 ，常见的标记方法包括放射性标记（例如32P或35S）或非放射性标记（例如荧光标记或生物素标记） 。
? 反应混淆：将标记的核酸探针与918博天堂质样品混淆 ，添加反应缓冲液 ，包括缓冲盐、非特异性竞争物和非特异性DNA或RNA 。
? 反应举行：将反应混淆物在适当的温度和时间下孵育 ，以促使918博天堂质与核酸团结形成复合物 。
? 电泳：将反应混淆物加载到聚丙烯酰胺凝胶电泳槽中 ，举行电泳疏散 。在非变性条件下举行电泳可以坚持918博天堂质与核酸的团结 。
? 凝胶牢靠和成像：电泳竣事后 ，凝胶牢靠并举行成像 ，例如通过放射线照射敏感的凝胶后 ，通过放射自显影或荧光成像检测标记的核酸探针 。
? 效果剖析：剖析凝胶图像 ，视察是否有918博天堂质-核酸复合物的形成 。918博天堂质-核酸团结会导致迁徙速率的减慢或带移动位置的改变 。
2、EMSA的应用
EMSA（Electrophoretic Mobility Shift Assay）是一种常用的实验手艺 ，用于研究918博天堂质与核酸（DNA或RNA）之间的相互作用 。它在许多研究领域中获得普遍应用 ，包括但不限于以下几个方面：
● 转录因子研究：EMSA可用于研究转录因子与DNA的团结 。通太过析转录因子与特定基因启动子或调控元件的团结能力 ，可以展现基因调控网络和转录调控机制 。
● RNA团结918博天堂研究：EMSA可用于研究RNA团结918博天堂（RNA-binding proteins ，RBPs）与RNA的相互作用 。通过探讨RBPs与目的RNA序列的团结 ，可以相识RBPs在转录后调控、RNA稳固性和翻译调控等历程中的功效 。
● DNA修复和损伤识别：EMSA可用于研究DNA修复酶和损伤识别918博天堂与DNA损伤位点的团结 。通太过析这些相互作用 ，可以深入相识DNA修复机制和DNA损伤应答通路 。
● 药物筛选和药物靶点研究：EMSA可用于筛选和评估潜在药物分子与特定DNA或RNA序列的团结能力 。通过检测药物与靶点的相互作用 ，可以评估药物的亲和力和选择性 ，为药物开发和靶向治疗提供主要信息 。
● 基因调控网络研究：EMSA可用于研究基因调控网络中的转录因子与调控元件之间的相互作用 。通太过析转录因子与特定启动子或增强子序列的团结 ，可以展现基因调控网络的结构和功效 ，以及转录因子在调控基因表达中的作用 。
● 疾病相关基因的功效研究：EMSA可用于研究与疾病相关的基因的功效调控 。通太过析疾病相关基因的启动子、增强子或调控元件与转录因子的团结 ，可以相识这些基因的调控机制和与疾病相关的功效转变 。
3、918博天堂质与核酸之间的相互作用有哪些 ，常用哪些手艺去检测？
? 918博天堂质与核酸之间的相互作用包括转录因子与DNA的团结、RNA团结918博天堂与RNA的团结以及其他918博天堂质与DNA或RNA的相互作用等 。常用的手艺用于检测这些相互作用的要领包括：
? 电泳迁徙实验（Electrophoretic Mobility Shift Assay, EMSA）：通过电泳迁徙剖析918博天堂质与DNA或RNA团结的迁徙差别 。该要领基于918博天堂质与核酸团结后形成复合物的迁徙速率差别 ，可定性剖析相互作用的保存与否 。
? 共沉淀实验（Co-precipitation Assay）：使用特定的亲和剂或抗体富集与目的918博天堂质相互作用的DNA或RNA分子 。该要领可用于定性和定量剖析相互作用的强度和特异性 。
? 免疫共沉淀实验（Immunoprecipitation, IP）：使用特定抗体选择性地富集目的918博天堂质及其团结的核酸 。该要领通过918博天堂质-抗体互作用实现918博天堂质与核酸的联络 ，可用于判断和定量剖析相互作用的918博天堂质和核酸分子 。
? 酵母双杂交（Yeast Two-Hybrid, Y2H）：通过使用酵母细胞内的转录激活和检测系统 ，研究918博天堂质与918博天堂质之间的相互作用 。该要领可用于筛选和判断918博天堂质-918博天堂质相互作用的交互配对 。
? 外貌等离子共振（Surface Plasmon Resonance, SPR）：通过监测918博天堂质与核酸相互作用引起的光信号转变 ，实时丈量它们的团结动力学和亲和力 。该手艺可提供定量的团结强度、关联息争离速率等信息 。
? RNA pull down：使用特定的RNA分子富集与目的RNA团结的918博天堂质 。该要领可用于判断与RNA相互作用的918博天堂质 ，从而展现RNA的功效和调控机制 。
? DNA pull down：使用特定的DNA序列富集与目的DNA团结的918博天堂质 。该要领可用于研究与DNA团结的918博天堂质 ，如转录因子和其他DNA团结918博天堂质 。
