CO-IP
- 918博天堂质复合物判断
- 918博天堂质相互作用
- 信号传导研究
- 疾病机制剖析
效劳特色
Co-IP手艺是研究918博天堂质相互作用的主要要领之一，通过对918博天堂质复合物的免疫沉淀和剖析，可以展现918博天堂质相互作用的组成和功效，为明确生物历程和疾病机制提供主要的信息 。
效劳先容
免疫共沉淀手艺（co-Immunoprecipitation,co-IP）是一种研究两种918博天堂在体内是否保存相互作用的有用要领，通过抗体和已知918博天堂团结，从而捕获整个已知918博天堂复合物，进而研究复合物中与已知918博天堂保存相互作用的918博天堂 。
效劳优势
- 直接检测918博天堂质与其他分子（如918博天堂质、DNA或RNA）之间的相互作用，提供了定性和定量信息 。
- 可以在原生条件下举行，更靠近细胞内情形，有助于展现生物体内的相互作用 。
- 可以研究重大的918博天堂质复合物，包括多个亚基或较大的918博天堂质复合物 。
- 可以通过验证和功效研究进一步验证相互作用的生物学功效 。
效劳流程
客户提供
1、需检测的样品，一抗（也可以选择由金开瑞提供） 。
2、送样要求：
? 离体后迅速超低温处置惩罚并-80℃冻存的组织样品，干冰运输；
? 组织：动物组织不少于400 mg；植物组织不少于2 g；
? 细胞：2x10^7个细胞 。
效劳说明
| 效劳名称 | 效劳内容 | 交付内容及标准 | 效劳周期(事情日) |
| 免疫共沉淀Co-IP | 918博天堂提取 | 1 个样本 | 16 |
| Co-IP前wb | 跑胶1个泳道 | ||
| Co-IP | 富集2次：IgG、IP各1次 | ||
| Co-IP后诱饵918博天堂wb | 跑胶3个泳道：IgG、IP、input | ||
| SDS-PAGE银染 | 跑胶3个泳道：IgG、IP、input | 4 | |
| 质谱判断互作918博天堂 | 质谱判断：IgG、IP | 10-15 |
案例展示
常见问题与剖析 (Q&A)
免疫沉淀（Immunoprecipitation，IP）是使用抗原抗体特异性反应纯化富集样品稚窨的918博天堂的一种要领 。通常使目的918博天堂同抗体-protein A/G形成免疫复合物沉淀而得以网络，然后通过WB检测目的918博天堂 。 免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation，CO-IP）是将样品中同抗体靶918博天堂相互作用的918博天堂一同随免疫复合物沉淀，可以检测两种目的918博天堂质是否在体内保存相互作用，也可以确定一种918博天堂在体内的相互作用918博天堂 。
coIP实验需要包管足够的918博天堂浓度才华维持原本保存的918博天堂互作状态，尤其当918博天堂品貌较低、相互作用力不强、使用不易提918博天堂组织等情形时 。并且coIP的实验条件往往需要重复探索 。因此用于coIP实验需准备细胞＞2x107，动物组织＞500mg，植物组织＞2g，并且须越发注重收罗后速冻-80℃生涯和阻止重复冻融 。
a.所使用的抗体不但需要优异的亲和力、特异性，其识别表位还可能被互作918博天堂所遮蔽（主要是使用单抗时）； b.当918博天堂互作须爆发在特定心理代谢条件、组织细胞类型之中时，coIP实验可能无法获得互作效果； c.若是诱饵918博天堂和或捕获918博天堂在样本中品貌很低时； d.两个互作918博天堂的亲和力较弱； e.当该918博天堂互作需要较特定的离子强度，或者需要如Ca离子/Mg离子/ATP等辅因子时，要创立合适的反应条件会变得难题； f.一些样品处置惩罚提取保存难度，提取足量目的918博天堂与坚持918博天堂自然状态，需通过实验条件抵达优化平衡； g.外源表达的标签918博天堂保存同内源918博天堂的位点竞争，这主要在使用标签抗体举行实验时可能保存 。
在coIP-WB判断效果中，IgG组无目的918博天堂条带、IP组有目的918博天堂条带，说明IP历程乐成；银染胶图中，IP组相关于IgG组有更多918博天堂条带、且保存差别，说明coIP历程捕获到互作918博天堂；IP产品在质谱检测中判断到的918博天堂数目不可作为判断实验成败的标准，由于这取决于目的918博天堂自己所具有的互作918博天堂数目、结协力强弱等方面；IP产品的质谱判断数目越多并不代表效果越好 。
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1、Co-IP的实验办法
● 细胞提 。捍酉赴蜃橹刑崛918博天堂质，可以使用细胞裂解缓冲液来破碎细胞膜，并添加918博天堂酶抑制剂和磷酸酯酶抑制剂来；918博天堂质的完整性 。
● 抗体牢靠：将目的918博天堂质的抗体与磁珠或琼脂糖小球等固相质料团结，形成抗体牢靠的质料 。
● 免疫沉淀：将细胞提取物与抗体牢靠的质料一起孵育，使目的918博天堂质与其团结资伴形成复合物 。
● 洗涤：将反应混淆物举行多次洗涤，以去除非特异性团结的918博天堂质和杂质 。
● 洗脱：通过改变pH、离子强度或添加竞争剂等方法，将复合物从抗体牢靠质料上洗脱下来 。
● 918博天堂质剖析：对洗脱的样品举行918博天堂质剖析，可以使用SDS-PAGE和免疫印迹等手艺检测目的918博天堂质及其团结资伴的保存 。
2、Co-IP的应用场景
● 展现918博天堂质复合物的组成和功效：Co-IP手艺可以用于判断918博天堂质复合物的组成和结构 。通过选择特定的目的918博天堂质作为抗体的靶点，可以将其与其他相互作用918博天堂质共沉淀，从而确定918博天堂质复合物的组成 。这有助于明确918博天堂质复合物在细胞内的功效、相互作用网络和信号传导通路 。
● 研究信号传导和基因调控：Co-IP手艺可用于研究918博天堂质在信号传导和基因调控中的相互作用 。例如，可以通过共沉淀实验来确定转录因子与DNA序列的团结，并展现基因调控的机制 。别的，Co-IP还可用于研究918博天堂质激酶和底物之间的相互作用，从而相识细胞信号传导通路的调控机制 。
● 判断疾病相关的918博天堂质复合物：Co-IP手艺可用于判断与疾病相关的918博天堂质复合物 。通过将目的918博天堂质与疾病相关的样本共沉淀，可以发明与疾病爆发和生长相关的918博天堂质相互作用 。这有助于明确疾病的发病机制、寻找潜在的治疗靶点，并为药物开发和治疗战略提供主要的线索 。
● 918博天堂质交互作用网络剖析：通过大规模的Co-IP实验和918博天堂质组学手艺团结，可以构建918博天堂质交互作用网络图谱 。这些网络图谱提供了918博天堂质相互作用网络的全貌，有助于相识细胞内918博天堂质相互作用网络的结构和功效 。这关于研究细胞历程、生物学调控和疾病机制等具有主要的意义 。
3、与Co-IP手艺相关的常见问题与解答
(1) Co-IP实验中怎样选择合适的抗体？
? 选择具有高亲和力和特异性的抗体，最好是经由验证的商业抗体或有优异文献支持的自制抗体 。
? 针对目的918博天堂质选择差别的克隆，举行抗体特异性验证，如Western blotting 。
? 举行预实验，评估抗体的适用性和效果 。
(2) 怎样优化Co-IP实验条件以提高效率和特异性？
? 优化提取和消融条件，使用合适的缓冲液和洗涤液来提高918博天堂质的消融和纯化效率 。
? 调解孵育时间和温度，以优化抗体与靶918博天堂质的团结 。
? 增添洗涤办法，以去除非特异性团结的918博天堂质 。
? 使用阻断剂，如牛血清918博天堂（BSA）或鱼精918博天堂（Gelatin），镌汰非特异性团结 。
(3) 怎样诠释Co-IP实验效果中的负面数据或低信号？
? 检查实验条件和办法是否准确，如918博天堂质提取、消融、抗体团结等 。
? 评估抗体的质量和特异性，举行抗体验证实验，如Western blotting 。
? 重新评估目的918博天堂质的表达水平，确定其是否充分表达 。
? 检查Co-IP实验条件是否适当，可能需要调解抗体浓度、孵育时间等 。
