引物合成
- 可监控每条引物的合成质量
- 多重质量检测手段
- 周全包管发货的质量
效劳特色
金开瑞引物合成平台引进天下上现在主流的合成仪制造商BLP公司生产的nm级别的Dr.oligo192高通量DNA合成仪 ，天天的通量可达2000条/台 。
效劳先容
引物合成是一种生物手艺 ，用于合成DNA或RNA的短链分子 ，通常用于PCR（聚合酶链反应）和其他分子生物学实验中 。引物是一段短链分子 ，通常包括20-30个碱基 ，能够与特定的DNA或RNA序列互补配对 ，从而指导聚合酶在该序列上扩增DNA 。引物合成通常使用自动化合成要领 ，在化学合成仪上一步步添加碱基来构建所需的序列 。引物合成手艺的生长使得DNA和RNA序列的快速和准确合成成为可能 ，为生物手艺和生物医学研究提供了主要的支持 。
常见问题
由于核酸在260 nm周围有强吸收 ，而918博天堂质在280 nm周围有强吸收 ，从生物体内提取核酸时 ，常用OD260/OD280比值来评价核酸纯度 (比值在1.8～2.0之间) ，这一判断是基于序列中A、G、C、T所占比例大致相同时的效果 。而合成的DNA/RNA则差别 ，序列很短 (通常在20～30个碱基之间) ，其中A、G、C、T种种碱基所占比例很不相同 ，由于种种碱基的摩尔消光系数差别 ，因此差别碱基组成的合成DNA/RNA制品的OD260/OD280比值也差别 ，例如当序列中C、T碱基的含量高时 ，该比值会大大低于1.8 。别的 ，序列中碱基的排列顺序也影响该比值 。以是不可凭证OD260/OD280比值来评价合成DNA/RNA制品的纯度 。
Oligo DNA的电泳一定要使用变性PAGE电泳 。Oligo DNA是单链DNA ，容易形成重大的立体结构 ，因此举行Agarose电泳时 ，容易泛起多条泳带 (更无法用Agarose电泳举行定量了) 。
A、G、C、T的组份差别 ，电泳速率差别； DNA的立体结构差别 ，电泳速率差别 。 这种情形在Oligo DNA越短时越容易爆发 ，长链Oligo DNA之间差别越小 。
没有 ，5' 和3' 最后均为-OH基 。如需要加磷酸基团 ，订货时请特殊注明 ，此时需收取磷酸化 (PO4修饰) 的用度 。
不可 。 由于EtBr是通过嵌入到核酸的双螺旋间而使其着色的 。合成的DNA/RNA分子为单链 ，只有通过自身回折形成局部发夹环结构或链间形成部分双螺旋结构 ，才华被EtBr染色 。由于差别制品的序列差别 ，形成双螺旋的能力差别 ，因此染色能力不尽相同 ，也就不可凭证EtBr染色带的亮度来对合成的DNA/RNA举行定量 。
毗连反应的引物若是没有5’磷酸基团 ，毗连效率相对较低 ，但不是完全不可乐成 。 若是磷酸化的产品还不可毗连载体上 ，需要检查载体的酶切效果以及核对引物的设计计划 ，若是都没有问题就要思量改善引物退火的条件以及毗连反应系统 。
合成DNA的长度为6～130个碱基；合成RNA的长度为8～35个碱基 。当合成的DNA序列较长时 ，由于合成及纯化要领的限制,很难包管制品中每个序列都准确无误 。别的需要说明的是：若是待合成序列较量特殊 (例如多个“G”一连泛起等) ，合成收率相对较低 ，我们可能会凭证详细情形加收用度；有时我们也可能无法合成订购的序列 ，此时本公司保存不接受定单的权力 。
干燥制品很稳固 ，-20℃下生涯2年没问题 。 消融后的DNA也请生涯于-20℃ ，最好是分份生涯 ，阻止重复冻融 。 溶液中的Oligo DNA在常温下安排3～4天应该没问题 ，但最好不要安排一个星期以上 。其寿命与容器、溶剂的灭菌水平有关 。
若是您消融引物的水PH过低或污染了菌或核酸酶 ，会使引物降解 。使用时没有充分解冻混淆 ，液体不匀称也可能会造成引物加入量禁绝确 。建议分装引物 ，阻止重复冻溶 。建议使用10mM Tris pH7.5缓冲液消融引物 ，由于有些蒸馏水的pH值较量低（pH4-5）, 引物在这种条件下不稳固 Ｉ杏幸恢挚赡苄允且锩挥形侍 ，而是PCR使用质料特殊是模板的质量与先前使用的不完全一致 。
合成的引物和您的定单序列一致 ，而不是能否扩增出您所需要的产品 。
合成Oligo DNA时 ，只管选用高纯度级制品 。 阻止使用过长的Oligo DNA ，最好选用小于35 mer的合成DNA制品 。 举行克隆实验时 ，每次克隆都须举行测序验证 ，以包管序列的准确性 ，然后再举行进一步实验 。举行918博天堂表达实验时 ，尤其需要注重 。
所有的制品纯化后都要举行脱盐 ，脱盐是使用C18柱举行的 ，偶而会有微量的树脂溢出而进入制品 。树脂不影响任何反应效果 ，请稍许离心后取上清使用 。
由于一样平常的PCR用引物的5′ 最后都没有磷酸基团 ，因此 ，扩增后的PCR产品的5′ 最后也没有磷酸基团 。当克隆于去磷酸化的最后平滑载体时 ，无法克隆进去；而当克隆于非去磷酸化的最后平滑载体时 ，配景会极高 。此时请对PCR产品的5′ 端举行磷酸 (PO4修饰) 化处置惩罚 。
PCR反应失败的缘故原由许多 ，可以从以下几个方面思量 。 1. 引物和模板是否配对 ，同源性有多大? 2. 引物自己是否有立体结构 ，或者二条引物之间是否形成高次结构? 3. PCR反应用试剂是否能正常事情? 4. PCR仪是否事情正常? 5. PCR反应条件是否合适? 若是一切正常 ，还无法解决问题时 ，我们可以免费重新合成引物 。若是重新合成的引物也无法解决问题时 ，请把引物和模板寄送给我们公司 ，我们可以资助探索PCR反应条件 。
基本不是 。当今生长出林林总总的PCR扩增手艺 ，林林总总的高温聚合酶 ，就是来解决PCR扩增中遇到的扩不出 ，扩增效率低的问题 。如槽式PCR就是扩增那些拷贝数很低的基因片断 。 有些重复片断的扩增, GC含量高的片断 ，非要接纳特殊扩增手段才华扩增出了 。 引物扩增不出 ，主要是下列两种情形较量常见： RT-PCR 。请注重 ，许多基因通过通例RT–PCR要领是很难不增出来的 。 RT- PCR乐成的要害在于RT的反应的RNA质量和目的基因在特定组织和细胞中含量 。 从基因组中扩增 。一样平常情形下 ，基因在基因组中都是单拷贝 ，基因组作为模板需要严酷控制用量 ；蜃镈NA过高 ，会影响反应系统中的Mg和pH 。
由于核酸在260 nm周围有强吸收 ，因此常凭证此性子 ，用紫外分光光度计测定核酸溶液在260 nm的吸光度值 ，据此对核酸举行定量 ，用OD值来体现 。1 OD是指：置于光路长度为1 cm的比色皿中的DNA/RNA溶液 ，若是其在260 nm处的吸光度值为1 ，则称1 ml该溶液中消融的DNA/RNA的量为1 OD 。1个OD值的合成DNA/RNA的质量约为33 μg 。将DNA/RNA溶液举行适当稀释 ，使吸光度测定值与样品浓度的关系在直线规模内 ，再凭证原溶液的总体积与稀释倍数盘算该溶液的总OD值 。 例如 ，一个200 μl的DNA/RNA溶液 ，若是对其举行6倍稀释 ，测定值为1.0时 ，则该溶液的总OD值为：0.2 ml×6×1.0 OD/ml=1.2 OD 。
合成DNA的长度为6～130个碱基；合成RNA的长度为8～35个碱基 。当合成的DNA序列较长时 ，由于合成及纯化要领的限制,很难包管制品中每个序列都准确无误 。别的需要说明的是：若是待合成序列较量特殊 (例如多个“G”一连泛起等) ，合成收率相对较低 ，我们可能会凭证详细情形加收用度；有时我们也可能无法合成订购的序列 ，此时本公司保存不接受定单的权力 。
没有 ，5' 和3' 最后均为-OH基 。如需要加磷酸基团 ，订货时请特殊注明 ，此时需收取磷酸化 (PO4修饰) 的用度 。
干燥制品很稳固 ，-20℃下生涯2年没问题 。 消融后的DNA也请生涯于-20℃ ，最好是分份生涯 ，阻止重复冻融 。 溶液中的Oligo DNA在常温下安排3～4天应该没问题 ，但最好不要安排一个星期以上 。其寿命与容器、溶剂的灭菌水平有关 。
干燥制品很稳固 ，-20℃下生涯2年没问题 。 消融后的DNA也请生涯于-20℃ ，最好是分份生涯 ，阻止重复冻融 。 溶液中的Oligo DNA在常温下安排3～4天应该没问题 ，但最好不要安排一个星期以上 。其寿命与容器、溶剂的灭菌水平有关 。
