噬菌体库筛选
- 高通量筛选
- 制品库
- 快速交付
效劳特色
金开瑞噬菌体平台现推出噬菌体制品库筛选效劳 ，知足您的抗体筛选需求！
效劳先容
噬菌体展示手艺通过将外源肽段和噬菌体衣壳918博天堂融合展收噬菌体外貌 ，举行高通量筛选及富集 ，并对所需功效的克隆举行定性剖析 ，该手艺展示工具涵盖抗体、抗体 片断、肽段、cDNA等。在对抗体库的研究中 ，噬菌体展示手艺可对人和其他动物的B细胞抗体库举行体外建库筛选 ，避开了免疫和细胞融合等办法从而缩短实验周期并增添了稳固性 ，该手艺还具有筛选容量大、可发酵大宗主产、要领简朴等优点。
效劳优势
- 多种制品噬菌体库可供使用；
- 固相和液相噬菌体展示文库筛选履历富厚 ，可自动化举行噬菌体展示高通量筛选 ，实现快速交付；
- 引入先进的亲和力检测手艺 ，深入的生物信息学剖析 ，选择最佳的人源框架区序列快速且高通量筛选高亲和力及高产量的人源化抗体；
- 片断插入率高。
最终交付
- 挑取单克隆举行ELISA?panning筛选检测 ，以高于空缺及阴性比照2.2倍为阳性克隆的判断标准安排测序：
- 1、在阳性克隆序列都差别的情形下 ，对差别阳性克隆举行diluted?ELISA ，至少设置3个梯度 ，至少交付3个ELISA最好的克隆 ，收费100%；
- 2、若效果不睬想 ，换用差别panning条件再做一次3-4轮的淘选 ，并继续挑单克隆测试是否有新克隆或更高亲和力的克隆泛起。若有新克隆泛起 ，继续往下做 ，并凭证上述标准收费 ，若无新克隆泛起 ，思量是自身项目的问题 ，该办法收费50%。
效劳说明
制品库
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序号 |
库种别 | 种属 | 自然库或其他 | 抗体基因泉源 | 标签 | 库容 |
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1 |
ScFv | 人 | 自然库 | 外周血 | E-tag/His-tag/HA | ≥7次方 |
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2 |
鼠 | |||||
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3 |
sdAb | 羊驼 | 自然库 | ≥9次方 | ||
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4 |
半合成库 | |||||
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5 |
7肽随机库 | \ | 随机肽库 | \ | \ | ≥9次方 |
| 6 | 12肽随机库 | \ | \ | \ | ≥9次方 |
注：制品库仅提供使用 ，差池外出售
案例展示
常见问题与剖析 (Q&A)
1）TG1宿主菌：用于被噬菌体熏染后扩增（特征：抗体序列和噬菌体的P3918博天堂通过TAG偶联 ，TG1菌的特点是对TAG既可以识别为终止子 ，即只表达出抗体 ，渗透上清中 ，也可识别为TAG编码的aa ，翻译成Q（谷氨酰胺） ，此时抗体序列即和噬菌体P3相连 ，展示在噬菌体外貌 ，以是此时上清是一个混淆物 ，通常用于筛。； 2）抗体库：有两种形式 ，一是TG1菌（内含展示抗体的phagemid） ，下一步若是要做筛选需添加辅助噬菌体 ，使phagemid包装到噬菌体上 ，使之成为含有抗体序列的噬菌体库 ，用于筛；二是已包装完成的噬菌体库（含有展示抗体的phagemid） ，下一步做筛选 ，着实二就是已经做完一的办法； 3）辅助噬菌体：构建好的小鼠自然抗体库通常以噬菌粒的形式生涯在宿主菌中 ，在淘选历程最先前 ，应领先拯救文库 ，使其成为噬菌体展示的抗体库辅助噬菌体 ，历程即添加辅助噬菌体 ，起作用是编码爆发另一些噬菌体所不可爆发的主要918博天堂质 ，使另一些噬菌体得以生长和滋生； 4）HB2151表达菌（特征：对ATG只能识别为终止子 ，是抗体单独渗透到上清中 ，主要用于表达。 备注：TG1和HB2151的差别是 ，TG1是终止密码抑制菌株 ，终止密码可以通读 ，HB2151就不可了 ，也就是说TG1可以表达scfv抗体-P3918博天堂 ，而HB2151可以只表达出scfv抗体。
关于噬菌体抗体库做筛选的话： 1.优势：抗体库手艺不但可以模拟动物免疫系统爆发抗体的历程 ，还具有许多奇异的优点 ，令杂交瘤手艺难以相比？固蹇馐忠瘴扌杳庖 ，从理论上讲 ，108-1010的库容就可能容纳所有的抗体。使用抗原即可直接从非免疫动物抗体库中筛选出特异性抗体 ，然后将阳性克盛大组到质粒表达载体 ，通过大肠杆菌或者真核细胞直接表达有功效的抗体分子 ，周期较短 ，通常16-20周即可完成一个自然抗体库的构建及筛选事情； 2.劣势：scfv抗体亲和力相对古板杂交瘤手艺获取的全抗体偏低或者相当 ，但若是不影响内源样本或者二三级结构的识别 ，该劣势点即可填补！ 古板杂交瘤手艺做筛选的话： 1.优势：通过多次免疫使动物体内爆发的抗体抵达亲和力成熟后 ，取动物的B淋巴细胞举行融合 ，经由多次亚克隆筛选获得可稳固渗透特异性抗体的杂交瘤细胞株 ，并能一连作育获得抗体 ，该种要领获得的抗体相对噬菌体抗体库筛选的单链抗体来说属于自然全抗体 ，抗体亲和力更高 ，可应用的实验类型也更为普遍 ，其次批间差较； 2.劣势：周期较长 ，一样平常从抗原制备最先到获得单链抗体 ，需要至少5个月的时间。
我们相助的噬菌体库筛选项目一样平常是这么个流程 ，客户拿到上清 ，会起源做下团结活性和部分功效验证 ，可用的测序拿到序列 ，然后批量构建 ，批量表达 ，筛选出高表达高亲和力的 ，再进一步测试是否有好比成药靶点潜力等实验。我们表达了这么多抗体项目履向来看 ，照旧要用哺乳系统。由于大肠系统很难实现上清表达 ，大多是容纳体 ，而抗体要想有功效 ，必需照旧上清表达 ，借助哺乳系统 ，加上可渗透到上清中的信号肽 ，而抗体效价跟抗体纯度跟浓度一定是分不开的
噬菌体的滴度很高 ，从之前的阳性测试就能看得出来 ，即便再稀释个10倍甚至100倍 ，都还会有2.0的读值 ，有少量非特异性吸附是很正常的 ，不然淘选阶段都团结上的噬菌体为什么ELISA筛选后 ，只有少量的克隆才华被挑选出来 ，测试交织这种 ，是需要在合适浓度的抗原抗体反应系统下举行的 ，尤其是间接ELISA ，不管是抗原照旧抗体 ，浓度过高 ，少量的非特异性团结更常见。
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1、噬菌体展示手艺的办法
噬菌体展示手艺的办法主要包括以下几个阶段：
①构建噬菌体展示文库：
● 获取目的918博天堂或多肽的编码序列。
● 选择适合的噬菌体展示系统 ，常用的包括M13噬菌体、T4噬菌体等。
● 将目的序列与噬菌体基因组中的外被918博天堂基因（coat protein gene）毗连 ，构建融合基因。
● 将融合基因插入噬菌体基因组中 ，构建噬菌体展示文库。
②噬菌体展示：
● 将构建好的噬菌体展示文库熏染到宿主细菌中 ，如大肠杆菌。
● 细菌表达噬菌体展示文库中的融合基因 ，使噬菌体颗粒表达在细菌外貌。
● 通详尽菌作育和噬菌体产出 ，获得大宗的噬菌体颗粒。
③筛选和选择：
● 准备目的分子 ，如918博天堂质、抗体、小分子化合物等。
● 将噬菌体展示文库中的噬菌体与目的分子举行特异性团结 ，一样平常接纳固相吸附、免疫筛选等要领。
● 对团结复合物举行洗涤 ，以去除非特异性团结的噬菌体。
● 通过洗脱或者其他要领 ，获得与目的分子团结能力较强的噬菌体。
④判断和剖析：
● 从筛选出的噬菌体中提取基因 ，一样平常接纳PCR扩增的要领。
● 对提取的基因举行测序 ，获取融合基因的序列信息。
● 剖析测序数据 ，确定与目的分子团结的918博天堂或多肽序列。
以上是噬菌体展示手艺的基本办法。在详细应用中 ，可以凭证需要举行优化和刷新 ，例如引入多肽标签用于检测和纯化、引入多重筛选办法以提高筛选效果等。噬菌体展示手艺的要害是构建高质量的展示文库和有用的筛选要领 ，以获得具有特定功效和团结性子的目的分子。
2、噬菌体展示手艺的应用
噬菌体展示手艺在生物医学研究、生物制药和生物手艺领域有普遍的应用。以下是一些噬菌体展示手艺的主要应用领域：
● 抗体工程：噬菌体展示手艺可用于抗体工程 ，用于筛选和优化具有高亲和力和特异性的抗体。通过构建噬菌体库 ，可以在大规模的抗体变异体中筛选出与特定抗原团结能力强的抗体。
● 肽和918博天堂质工程：噬菌体展示手艺可以用于筛选和刷新具有特定功效的肽和918博天堂质。通过展示肽或918博天堂质变体库 ，可以选择具有特定性子的分子 ，如酶活性、团结活性、药物亲和性等。
● 药物发明和开发：噬菌体展示手艺可用于药物发明和开发。通过在噬菌体上展示小分子化合物库 ，可以筛选出与特定靶点团结的潜在药物候选物。
● 918博天堂质相互作用研究：噬菌体展示手艺可用于研究918博天堂质之间的相互作用。通过将两个918博天堂质或多肽的编码序列毗连到噬菌体基因组中 ，可以在噬菌体颗粒外貌同时展示这两个918博天堂质或多肽 ，并研究它们之间的团结性子和相互作用机制。
● 疫苗设计：噬菌体展示手艺可用于疫苗设计。通过展示病原体的抗原918博天堂质或多肽片断 ，可以诱导免疫反应 ，爆发特定的抗体和免疫应答 ，从而用于疫苗的开发和疾病预防。
● 诊断工具和生物传感器：噬菌体展示手艺可用于开发诊断工具和生物传感器。通过展示特定的诊断标记物或靶分子 ，可以用于检测和监测疾病标记物、细菌、病毒等。
3、噬菌体展示手艺中涉及到的一些专属名词及释义
● 噬菌体（Phage）：一种寄生于细菌的病毒 ，可以使用其基因组中的外被918博天堂基因来展示目的918博天堂或多肽。
● 噬菌体展示（Phage Display）：将目的918博天堂或多肽的编码序列与噬菌体基因组中的外被918博天堂基因毗连 ，并通过噬菌体颗粒外貌展示目的分子的手艺。
● 外被918博天堂基因（Coat Protein Gene）：噬菌体基因组中编码组成噬菌体颗粒外被918博天堂的基因。
● 噬菌体展示文库（Phage Display Library）：包括大宗噬菌体颗粒的荟萃体 ，每个颗粒外貌展示着差别的918博天堂或多肽变体。
● 多肽标签（Peptide Tag）：在目的918博天堂或多肽的编码序列中引入的短小肽段 ，用于检测、纯化或定位目的918博天堂或多肽。
● 固相吸附（Solid-phase adsorption）：一种常用的筛选要领 ，通过将固相质料（如酶联免疫吸附板）与目的分子团结 ，使噬菌体与目的分子特异性团结。
