RIP-qPCR
- RNA-918博天堂质相互作用
- 非编码RNA和编码RNA
- 高迅速度
- 高特异性
效劳特色
RIP手艺是研究RNA-918博天堂质相互作用的主要工具，它可以展现RNA和918博天堂质之间的功效关系、调控机制以及在疾病爆发和生长中的作用 。凭证客户需求，金开瑞可以提供RNA/918博天堂、RNA/RNA互作验证RIP手艺效劳 。
效劳先容
RIP手艺（RNA Binding Protein Immunoprecipitation Assay，RNA 团结918博天堂免疫沉淀）主要是运用针对目的918博天堂的抗体把响应的RNA-918博天堂复合物沉淀下来，然后经由疏散纯化就可以对团结在复合物上的RNA 举行q-PCR验证或者测序剖析 。RIP 是研究细胞内RNA与918博天堂团结情形的手艺，是相识转录后调控网络动态历程的有力工具，可以资助我们发明miRNA的调理靶点 。
效劳优势
- 高迅速度和高特异性：RIP手艺能够高度富集RNA和与之相互作用的918博天堂质，具有较高的迅速度和特异性
- 低样本量要求：RIP手艺可以在较少的细胞或组织样本中举行实验，镌汰实验本钱和样本需求
- 适用于多种RNA种类：RIP手艺适用于差别类型的RNA研究，包括长链非编码RNA和编码RNA
- 不需要事先相识RNA-918博天堂质相互作用的信息：可用于探索未知的RNA-918博天堂质相互作用
- 可量化剖析：RIP手艺可以举行定量剖析，评估差别条件下的相互作用的强度和稳固性
- 团结其他手艺的团结应用：RIP手艺可以与其他手艺相团结，如RNA测序、918博天堂质组学和转录组学等，举行综合剖析，深入展现RNA-918博天堂质相互作用的功效和调控机制
效劳流程
客户提供
目的918博天堂抗体（可用于IP）及其说明书；
需检测的细胞样品；
目的基因、目的918博天堂信息 。
最终交付
- 原始数据、效果图片（包括阴性比照效果）；
- 标准实验报告（包括详细的质料与要领）；
- SCI标准Result Figure 。
效劳说明
| 效劳名称 | 效劳内容 | 交付内容及标准 | 效劳周期(事情日) |
| RIP-q-PCR （Protein-RNA） |
RIP前WB | 1个样本，1个抗体 | 20 |
| RIP | 富集2次：IgG、IP各1次 | ||
| RIP后WB | IgG，IP，input各1次 | ||
| QPCR | IgG，IP，input各1个泳道 | ||
| Ago2-RIP （miRNA-RNA） |
QPCR检测目的RNA 的本底表达 | 含miRNA过表达和比照组，每组含IgG、Ago、Input检测 | 28 |
| RIP | 富集2次：IgG、IP各1次 | ||
| QPCR | IgG，IP，input各1个泳道 |
案例展示
常见问题与剖析 (Q&A)
（1）已知918博天堂与已知RNA互作QPCR验证；已知918博天堂与未知RNA互作二代测序筛选 。 （2）已知RNA与已知RNA互作QPCR验证；已知RNA与未知RNA互作二代测序筛选 。
理论上，可以接纳能划分抽提核浆918博天堂的918博天堂抽提kit先疏散样本，再举行RIP实验 。但需要特殊注重的是所用kit中的reagent不可有RNase和DNase，以及要能与下游的抗体beads孵育兼容 。
相关手艺效劳
相关资源
1、RIP手艺的实验办法
● 细胞提 。捍酉赴刑崛∽918博天堂质，包括RNA团结918博天堂质
● 免疫共沉淀：将提取的细胞918博天堂质与特异性抗体团结，形成免疫复合物
● 沉淀：使用918博天堂A/G磁珠等具有亲和性的质料，将免疫复合物沉淀下来
● 洗涤：通过洗涤办法去除非特异性团结的918博天堂质
● 逆交联：将免疫复合物与RNA解离，并逆交联，释放RNA分子
● RNA提 。捍幽娼涣难分刑崛NA
● 剖析：对提取的RNA举行定量PCR、RNA测序或其他RNA剖析要领，用于判断与特定RNA相互作用的918博天堂质
2、RIP手艺的应用
● RNA调控网络的研究：RIP手艺可以资助我们展现RNA-918博天堂质相互作用在基因调控中的作用 。通过判断与特定RNA相互作用的918博天堂质，我们可以相识RNA的转录、剪接、稳固性和翻译等方面的调控机制，从而展现RNA调控网络的重大性和动态性 。
● 疾病相关的RNA-918博天堂质相互作用研究：RIP手艺可以用于研究与疾病相关的RNA-918博天堂质相互作用 。通过较量疾病样本和正常样本中的RNA-918博天堂质相互作用，我们可以发明与疾病爆发和生长亲近相关的RNA-918博天堂质相互作用，从而提供新的疾病诊断和治疗靶点 。
● 新型RNA团结918博天堂质的发明：RIP手艺可以资助我们发明新的RNA团结918博天堂质 。通过判断与特定RNA相互作用的918博天堂质，我们可以发明那些在古板要领中未被发明的RNA团结918博天堂质，从而展现更多未知的RNA功效和调控机制 。
● RNA-918博天堂质相互作用在药物研发中的应用：RIP手艺可以在药物研发历程中施展作用 。通过研究特定药物对RNA-918博天堂质相互作用的影响，我们可以评估药物的效果和清静性，为药物研发提供主要的信息和指导 。
3、RIP实验效果不如预期怎样优化
（1）低信号强度：若是RIP实验的信号强度较低，可能是由于以下缘故原由：
? 优化抗体浓度：实验调解抗体的浓度，增添或镌汰抗体的用量，以获得更好的信号与噪音比 。
? 增添孵育时间：延伸孵育时间可以增添目的RNA和918博天堂质的团结，从而提高信号强度 。
? 优化实验条件：调解反应温度、缓冲液因素等实验条件，以最大化团结效率 。
（2）高配景噪音：若是RIP实验保存较高的配景噪音，可能需要思量以下优化步伐：
? 优化洗涤办法：增添洗涤办法的次数和强度，以有用去除非特异性团结物质，镌汰配景噪音的滋扰 。
? 优化抗体选择：确保选择具有较低非特异性团结能力的抗体，以镌汰配景信号 。
? 增添阴性比照：引入适当的阴性比照，如使用非特异性抗体或非相关RNA序列，以资助区分真实信号和配景噪音 。
（3）非特异性团结：若是RIP实验保存非特异性团结问题，可以实验以下优化战略：
? 优化洗涤条件：增添洗涤缓冲液的浓度和洗涤时间，以更彻底地去除非特异性团结物质 。
? 使用更严酷的阴性比照：选择更具特异性的阴性比照，确保它与目的RNA不保存相互作用 。
? 预实验和比照实验：举行预实验和比照实验，以验证特异性团结并扫除非特异性团结的影响 。
（4）效果纷歧致或不可重复：若是RIP实验效果在重复实验中保存纷歧致或不可重复的问题，可以思量以下优化步伐：
? 增添实验重复次数：增添实验的重复次数，以提高效果的一致性和可靠性 。
? 核对实验办法：仔细核对实验办法，确保实验操作的一致性和准确性 。
? 校准实验条件：重新校准实验条件，包括反应时间、温度和孵育条件等，以确保实验的可重复性 。
