酵母双杂交
- 核918博天堂酵母双杂交
- 膜918博天堂酵母双杂交
效劳特色
金开瑞可提供酵母杂交文库构建、核酵母双杂交筛选、膜酵母双杂交筛选、酵母单/双杂交验证效劳。
效劳先容
酵母双杂交及系统是一种判断和检测918博天堂质相互作用的研究要领，因其具有迅速性高、功效强盛、适用规模广等特点，现已被应用于多个研究领域。
核918博天堂酵母双杂交：
核918博天堂酵母双杂交手艺最初由Fields等人在研究酵母转录因子GAL4性子时建设，后续经由一直刷新已生长成为一种成熟的918博天堂-918博天堂互作研究工具，具有轻盈、迅速、可反应918博天堂在活细胞内互作真真相形的特点，被普遍应用于互作918博天堂的筛选、918博天堂相互作用的判断/验证、918博天堂互作机理的探讨、918博天堂连锁图谱绘制等事情。
膜918博天堂酵母双杂交：
DUALmembrane手艺在古板的酵母双杂交系统的基础上，巧妙地使用疏散的泛素系统(split-ubiquitin) 举行918博天堂质相互作用的筛；泛素作为降解信号分子，人为分成两部分：N端 (Nub)，C端 (Cub)，互补重构的完整泛素分子可被泛素专一性918博天堂酶(UBPs)识别，从而导致与泛素相连的918博天堂被酶解。
效劳优势
- 一站式辅助检测手段利便快捷，获得可靠的实验结论；
- 多年文库构建履历，4种优化的Total RNA提取手艺计划可以有用包管Total RNA的纯度和完整性，包管样本的多样性。
- 直接检测918博天堂质之间的相互作用，而不依赖于其他分子或细胞的加入；
- 可同时筛选和判断多个918博天堂质间的相互作用，实现高通量的筛选和剖析；
- 接纳多个筛选办法，如报告基因的验证和酵母菌株的双重选择，可以镌汰非特异性相互作用的假阳性效果；
- 可通过报告基因的表达水平定量评估918博天堂质相互作用的强度，进一步相知趣互作用的动力学和功效。
效劳说明
效劳流程
酵?杂交?库构建：
酵母单杂交文库筛选
酵母杂交验证：
| 效劳项目 | 应用 | 互补实验 |
| 酵?杂交?库构建 | 酵?杂交筛选 | / |
| 核酵?双杂交筛选 | 获得与已知蛋?互作的未知蛋? | COIP，GST pulldown |
| 膜酵?双杂交筛选 | 研究膜蛋?之间的互作 | COIP，GST pulldown |
| 酵?单/双杂交验证 | 已知蛋?与蛋?/启动?之间的互作 | EMSA，双荧光素酶，COIP，GST pulldown |
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效劳项目 |
客户提供 | 最终交付 |
| 文库构建 |
组织/细胞 |
滴度在1×10cfu/mL以上的酵母文库菌液；文库PCR判断效果图片(阳性率在90%左右) |
| 文库筛选 |
918博天堂序列/基因序列/质粒 |
筛选历程中的所有原始图片；筛选获得所有相互作用的猎物918博天堂的测序效果 |
案例展示
相关手艺效劳
| ? 双荧光素酶报告系统 | ? CO-IP | ? EMSA |
| ? RNA pull-down | ? RIP-qPCR | ? DNA pull-down |
| ? ChIP-qPCR | ? 酵母单杂交 | ? CUT&Tag |
相关资源
一、酵母双杂交手艺与其他实验要领团结使用，进一步验证和深入研究相互作用的效果。以下是一些常见的与酵母双杂交手艺团结使用的实验要领和手艺：
● 共沉淀实验（Co-immunoprecipitation）：通过共沉淀实验可以验证在酵母双杂交中发明的918博天堂质相互作用是否在真实生物情形中爆发。该实验通过特定抗体与目的918博天堂质团结，并随后使用免疫沉淀手艺将与其相互作用的918博天堂质一起沉淀下来，以进一步证实相互作用的保存。
● 免疫荧光染色（Immunofluorescence Staining）：通过免疫荧光染色可以确定918博天堂质相互作用的亚细胞定位和动态转变。该手艺使用特定抗体与目的918博天堂质团结，并通过荧光标记的二抗或荧光标记的918博天堂质团结域来可视化相互作用的位置和形式。
● 酶联免疫吸附实验（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay, ELISA）：ELISA可以定量测定918博天堂质之间的相互作用强度。通过将酵母细胞裂解提取的918博天堂质与特定抗体团结，再用标记的二抗和酶底物举行检测，可以测定相互作用的强度。
● 918博天堂质结构剖析手艺：例如X射线晶体学和核磁共振等手艺，可以用于剖析918博天堂质相互作用的三维结构，进一步相知趣互作用的机制和结构特征。
● 918博天堂质组学剖析：通过质谱手艺（如质谱联用手艺）可以判断和定量测定与目的918博天堂质相互作用的918博天堂质。这种要领可以提供更周全的918博天堂质相互作用网络信息。
● 基因表达剖析：通过基因表达剖析要领（如实时定量PCR、RNA测序等），可以确定与目的918博天堂质相互作用的基因的表达水平的转变。这有助于相识918博天堂质相互作用对基因调控的影响。
● 细胞荧光共定位剖析：通过将荧光918博天堂标记的918博天堂质与目的918博天堂质共表达，通过荧鲜明微镜视察它们在细胞中的共定位情形，可以进一步证实它们的相互作用。
● 组织特异性表达剖析：通过组织特异性表达剖析要领（如原位杂交、免疫组化等），可以确定与目的918博天堂质相互作用的基因在差别组织中的表达模式，从而相识918博天堂质相互作用的组织特异性。
● 代谢标记手艺：通过代谢标记手艺（如918博天堂质生物素标记、918博天堂质荧光标记等），可以跟踪和定量测定918博天堂质相互作用的时空动态转变。
二、研究918博天堂质之间相互作用的要领简介、应用场景、优劣势及优化建议
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要领 |
简介 |
应用场景 |
优劣势 |
优化建议 |
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酵母双杂交 （Yeast Two-Hybrid） |
使用酵母细胞内的转录激活和检测系统， 筛选和判断918博天堂质之间的相互作用 |
展现918博天堂质相互作用网络、调控机制、代谢途径等生物历程 |
优势：高通量筛选、心理相关性、定量剖析能力； 限制：非自然情形、假阴性效果 |
选择适当的诱饵和猎物构建战略，优化作育条件， 使用高迅速性检测系统举行验证， 增添筛选办法和互补手艺举行验证。 |
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（Co-immunoprecipitation） |
使用特异性抗体富集目的918博天堂质及其团结的互作同伴 | 研究918博天堂质复合物的组成、结构和功效 |
优势：生物相关性、较低的假阳性率、定性和定量剖析能力； 限制：特异性抗体的选择、手艺重大性 |
选择合适的抗体，举行前处置惩罚办法以镌汰非特异性团结， 使用比照实验验证效果，团结其他手艺举行互补验证。 |
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外貌等离子体共振 （Surface Plasmon Resonance，SPR） |
监测918博天堂质团结到传感芯片外貌的光学信号转变 | 评估918博天堂质团结的动力学、亲和力和特异性 |
优势：高迅速度、实时监测； 限制：装备和实验手艺的要求 |
选择适当的传感芯片和团结条件，优化实验参数和流速， 增添比照实验和质控办法，优化数据剖析息争释。 |
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核磁共振 （Nuclear Magnetic Resonance，NMR） |
通过丈量核磁共振谱来研究918博天堂质的结构和相互作用 | 研究918博天堂质的折叠状态、团结界面和动态转变 |
优势：高区分率、提供结构和动态信息； 限制：装备和手艺要求、样品的制备和稳固性 |
选择适当的标记方法和溶剂条件，优化样品纯度和浓度， 选择适当的NMR实验计划，优化数据收罗和处置惩罚以提高信噪比。 |
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光学显微手艺 （Fluorescence Microscopy） |
视察918博天堂质在细胞内的动态漫衍和相互作用 | 研究918博天堂质相互作用的时空动态、细胞信号传导和调控机制 |
优势：实时视察、非侵入性； 限制：需标记918博天堂质、区分率和深度的限制 |
选择合适的标记要领和探针，优化成像条件和细胞处置惩罚办法， 使用高区分率成像系统和图像剖析软件举行定量和定性剖析。 |
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GST pull-down |
使用GST-融合918博天堂将目的918博天堂质及其团结的互作同伴富集， 通过亲和纯化和检测来剖析相互作用 |
判断918博天堂质相互作用、筛选团结资伴、研究918博天堂质结构和功效 |
优势：简朴易行、高纯度富集、适用于大规模筛； 限制：需918博天堂质的表达和纯化、可能保存非特异性团结和假阳性 |
优化选择合适的GST标签和亲和纯化条件， 举行比照实验和负比照实验， 团结其他手艺举行互补验证， 使用高迅速性检测要领举行验证。 |
三、酵母双杂交手艺适用于多个研究领域，包括但不限于以下方面：
● 918博天堂质相互作用研究：酵母双杂交手艺普遍应用于研究918博天堂质之间的相互作用网络。通过识别和验证918博天堂质间的相互作用关系，可以展现918博天堂质复合物的组成和结构，从而深入相识细胞信号传导、转录调控、代谢途径等生物历程。
● 918博天堂质功效研究：通过酵母双杂交手艺，可以研究918博天堂质的功效和调控机制。例如，通过识别918博天堂质与转录因子、核酸团结918博天堂等的相互作用，可以相识918博天堂质在基因调控中的作用，以及调控网络的建设和维持。
● 药物研发：酵母双杂交手艺可应用于药物研发领域。通过筛选药物分子与靶918博天堂之间的相互作用，可以评估药物的潜在效果和副作用，优化药物设计，加速药物发明历程。
● 疾病研究：酵母双杂交手艺可用于研究与疾病相关的918博天堂质相互作用。通过筛选与疾病相关基因的相互作用918博天堂质，可以展现疾病的爆发气制，寻找潜在的治疗靶点。
● 进化生物学研究：酵母双杂交手艺可以用于研究物种间的918博天堂质相互作用。通过较量差别物种中的相互作用网络，可以相识918博天堂质相互作用的进化转变，探讨物种顺应性和进化的基础。
总而言之，酵母双杂交手艺在多个研究领域具有普遍的应用。它为研究918博天堂质相互作用、展现918博天堂质功效和调控机制、药物研发和疾病研究等提供了有力的实验工具和要领。
