918博天堂

荧光素酶918博天堂互补实验(LCA)

荧光素酶918博天堂互补实验(LCA)

  • 高迅速
  • 低配景
  • 实时监测
  • 非侵入性

效劳特色

与其它918博天堂质互作研究手艺相比, 借助于烟草瞬时表达系统的荧光素酶918博天堂互补实验(LCA)具有简朴、迅速、可靠、高效和低配景等优点, 并可轻松扩展为大规模918博天堂质互作的筛选和验证研究。

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效劳先容

荧光素酶918博天堂互补实验(Luciferase Complementation Assay,LCA)用于判断两个918博天堂是否能够互作,将荧光素酶918博天堂的两个片断划分毗连到两个差别的待测918博天堂上,若两个918博天堂能够团结,则荧光素酶918博天堂得以补全酶解底物发出荧光。

效劳优势

  • 高迅速度:LCA能够检测低至皮摩尔级别的918博天堂质互作,这使得它很是适合于研究低品貌918博天堂质的相互作用。
  • 实时监测:由于荧光素酶催化反应迅速,且生物发光信号强,LCA能够实现实时监测918博天堂质互作,无需牢靠或裂解细胞,从而镌汰了样品处置惩罚历程中的损失和变异。
  • 非侵入性检测:LCA在活细胞内举行,不会破损细胞结构,允许在心理条件下视察918博天堂质互作,提供更真实的生物学情形下的互作信息。
  • 动态规模宽:LCA能够笼罩普遍的互作强度,从弱到强的互作均可检测。

客户提供

由我司基因合成:

提供918博天堂CDS序列即可。

客户提供模板质粒:

1、客户提供载体/模板:需要提供载体mcs测序报告/模板测序效果,如无测序报告则需另外收取测序用度,由金开瑞代为测序;

2、客户提供菌液:菌液量应≥0.5mL,安排一年以上的甘油菌需活化后送样;

3、客户提供质粒:质粒量≥5ug;

4、菌液和液态质粒均需冰袋运输。

最终交付

  • 返还目的基因剩余质粒;
  • 默认做3个阴性比照,1个实验组;
  • 交付3片叶子照片;
  • 结题报告以及所有原始数据。

效劳说明

效劳名称

效劳内容

交付内容及标准 效劳周期(事情日)
荧光素酶918博天堂互补实验(LCA)

质粒提取

返还目的基因剩余质粒 15

注射烟草

默认做3个阴性比照,1个实验组

拍摄照片

交付3片叶子照片

案例展示

常见问题与剖析 (Q&A)

Q:实验中检测到的荧光信号较弱。

A:确保荧光素酶的两个片断准确地融合到待测918博天堂质上,且表达载体没有构建过失;提高细胞或生物体的转染或转化效率;增添细胞数目或生物质料量;确认底物新鲜且浓度适当。

Q:配景信号过高。

A:镌汰非特异性团结,好比调解洗涤条件或使用适当的关闭试剂;确保细胞康健,阻止细胞裂解导致的内源性荧光素酶泄露;设立没有预期互作的比照组,以确定配景水平。

Q:效果重复性差。

A:标准化实验操作,确保每次实验的条件一致;引入内参控制,如β-半乳糖苷酶或GFP,用于标准化荧光素酶活性;多次重复实验,以统计学要领评估数据的一致性和可靠性。

Q:无法检测到918博天堂质互作。

A:通过Western Blotting等要领确认918博天堂质的表达水平;确保实验条件适合918博天堂质互作;思量使用差别的918博天堂质片断或突变体。

相关资源

1、荧光素酶918博天堂互补实验为什么选择烟草叶片作为实验质料?

    ● 易于转化与表达:烟草植物(尤其是本氏烟草,Nicotiana benthamiana)是植物分子生物学研究中常用的模式植物之一,由于它关于基因转化具有很高的效率,特殊是通过农杆菌介导的瞬时表达系统。这使得LCA所需的重组荧光素酶片断可以在烟草叶片中快速、高效地表达。

    ● 叶片大且平展:烟草叶片较大且外貌平展,适合举行局部的注射或浸润处置惩罚,便于举行农杆菌介导的基因转移,同时也有利于视察实验效果,如生物发光信号的检测。

    ● 快速的心理响应:烟草叶片在转化后24-48小时内即可视察到荧光素酶的活性,这反应了918博天堂质的快速表达和互作,缩短了实验周期。

    ● 低配景荧光:烟草叶片自己不含或含有极低水平的内源荧光素酶活性,这降低了配景信号,提高了实验的信噪比,使得918博天堂质互作的检测越发敏感和可靠。

    ● 适合大规模实验:烟草叶片的大面积和易操作性使其适合举行大规模的918博天堂质互作筛选实验,尤其是在需要较量大宗样本的情形下。

    ● 成熟的手艺系统:由于烟草叶片在植物遗传转化和918博天堂质表达研究中的普遍应用,已经建设了成熟的手艺系统,包括高效的基因递送、918博天堂质表达和检测要领,这为LCA的实验提供了便当。

    ● 经济可行性:烟草植物易于作育和维护,与动物细胞相比,其本钱较低,适合恒久和大规模的研究项目

 

2、荧光素酶918博天堂互补实验在多个研究领域中展现出普遍的应用价值,主要包括哪些?

    ● 918博天堂质互作研究:LCA能实时监测活细胞内918博天堂质间的直接或间接相互作用,为明确细胞信号传导、复合体组装及918博天堂质网络提供数据。

    ● 植物科学:LCA在植物激素响应、抗逆境信号转导等领域有所应用,增进作物改良和农业生产。

    ● 药物发明与筛。和ü觳馓囟918博天堂质互作的转变,LCA可应用于高通量药物筛选,加速新药开发历程。

    ● 信号转导剖析:LCA资助展现信号918博天堂怎样在细胞内相互作用并转达信号,深入探讨信号转导通路的分子机制。

    ● 病原体-宿主互作:LCA在剖析病原体熏染机制、宿主防御反应及免疫应答中施展作用,增进对熏染性疾病的明确。

    ● 遗传疾病机制:通过研究疾病相关918博天堂质的异;プ,LCA助力遗传疾病的爆发和生长机理研究。

    ● 肿瘤学:该手艺用于研究肿瘤爆发、生长历程中的918博天堂质互作网络,为癌症治疗提供理论基础。

 

3、荧光素酶918博天堂互补实验通常与其他实验手艺联用,以增强实验的准确性和周全性,或者从差别角度验证和增补实验效果。

    以下是一些常见的与LCA联用的实验手艺:

    ● 免疫共沉淀(Co-IP):Co-IP是一种经典的918博天堂质互作检测要领,通过抗体特异性地富集目的918博天堂及其团结资伴,随后通过SDS-PAGE和Western Blotting举行剖析。与LCA联用可以验证918博天堂质互作的真实性,并提供互作918博天堂的直接证据。

    ● 荧光共振能量转移(FRET):FRET手艺通过检测两个荧光基团之间的能量转移来监测918博天堂质间的近距离相互作用。与LCA团结使用可以提供互作918博天堂间距离的信息,进一步确认918博天堂质复合体的结构特征。

    ● 质谱剖析(MS):在LCA检测到918博天堂质互作后,通过质谱剖析可以判断出互作918博天堂的详细种类,提供918博天堂质组学层面的信息,有助于构建详细的918博天堂质互作网络。

    ● 酵母双杂交(Y2H):Y2H是一种在酵母细胞内检测918博天堂质互作的要领,特殊适合于大规模筛选未知互作918博天堂。与LCA联用可以相互验证,特殊是在高通量筛选后的验证阶段。

    ● 细胞图像剖析:通过荧鲜明微镜或共聚焦显微镜视察细胞内918博天堂质定位和漫衍,与LCA联用可以提供918博天堂质互作的空间信息,相识918博天堂质复合体的亚细胞定位。

    ● 基因默然手艺(siRNA/shRNA/Crispr-Cas9):通过基因默然手艺降低特定918博天堂质的表达水平,可以研究该918博天堂在918博天堂质互作网络中的作用,与LCA团结使用可以进一步探讨918博天堂质互作的功效意义。

    ● ChIP-seq:针对转录因子的研究,Chromatin Immunoprecipitation followed by sequencing (ChIP-seq) 可以确定转录因子在全基因组规模内的团结位点,与LCA联用可以深入明确转录因子复合体的组成和作用机制。

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