染色体免疫共沉淀(Chromatin Immunoprecipitation,ChIP)是用来研究918博天堂质与DNA是否在体内保存相互作用,这项手艺资助研究者判断在细胞核中基因组的某一特定位置会泛起何种组918博天堂修饰。使用抗体抗原特异性团结,将与目的918博天堂相团结的DNA片断沉淀下来,能够真实地反应团结在DNA序列上的调控918博天堂。

Q1:怎么探索超声条件

1)接触式超声仪:取2mLEP管,加入1.4mL液体,将探头置于EP管中心,液面下约一半的位置,设置超声时间为10S,逐渐增添功率,直至最先起泡,此时功率为超声最大功率。在此基础上设置三个不 同的功率梯度和时间梯度举行探索。

2)非接触式:可按厂家推荐举行探索。

Q2:超声后片断不切合要求

1)有切合要求的片断也有较量集中无法超声的大片断,可能是交联温度过高,交联时始终坚持温度低于25℃,尤其是炎天温度较高可将试剂和样本安排空调出风口一段时间再举行操作。

2)片断很集中且小于200bp,超声功率和时间不对适,需要做预实验探索最佳超声条件。

Q3:IP和IgG样本Ct值没有差别

1)抗体没有富集到DNA,可替换抗体实验。

2)lgG配景过高,可增添洗涤次数或镌汰免疫沉淀办法DNA投入量。

3) 团结位点展望过失,需重新设计引物。

Q4:消融曲线异常

消融曲线非简单峰,可能为非特异扩增或有引物二聚体等情形,需重新设计引物。

Q5:样本DNA浓度很低,低于10ng/μL

1)样本投入量过少:思量增添样本初始投入量,尤其是肌肉,心脏等。

2)裂解不完全:样本太过交联或研磨不充分。

3) 如罹难裂解样本可在加入LysisBuffer后-80℃急速冷冻,37°C解冻,重复冻融3次。

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