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RNA pull-down试剂盒

RNA pull-down试剂盒

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产品编号 规格 数目
JKR23004
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实验原理

RNA pull-down是研究细胞内RNA与918博天堂/RNA团结情形的手艺 。先将RNA举行标记(如生物素标记),再与细胞裂解液配合孵育,从而形成RNA-RNA/918博天堂质复合物,进而检测与之团结的RNA或918博天堂质 。复合物洗脱后,通过荧光定量PCR(RNA pull down-QPCR)或高通量测序(RNA pull down-seq)要领来判断目的RNA是否与某些RNA分子相互作用,通过Western blot(pull down-WB)实验和质谱(pull down-
MS)手艺检测目的RNA是否与某些918博天堂相互作用 。

实验流程

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试剂盒组分

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常见问题

Q1: 实验全程怎样预防RNA降解 ?

实验使用的所有试剂耗材需经已往RNA酶处置惩罚 。

 

Q2:RNA pull-down?定要体外转录合成RNA探针吗 ?

体外转录只是获得RNA的?种?式,相比化学合成纯度更高 。以是pull-down实验?般是体外转录获得目的RNA 。当目的RNA序列大于2000bp时体外转录就不太容易转录乐成,这时我们可以设计合成?小段目的RNA探针,通过探针与目的RNA团结,再与918博天堂团结,便可绕过这个问题 。

 

Q3:RNA在转录出来后,其OD?般都不高,可以使用吗 ?怎样定量呢 ?

OD值不高可举行RNA纯化,即便不纯化在实验中多加?些RNA亦可 。而定量问题?般会举行琼脂糖凝胶电泳检测,可以凭证marker浓度来判断RNA的浓度 。也可以用仪器丈量RNA的浓度,但通过体外转录获得的RNA浓度都能抵达2μg/uL以上 。并且pull-down实验不需要准确的定量,都会加入过量的探针 。

 

Q4:关于样本处置惩罚,细胞或者组织裂解时要不要加918博天堂酶抑制剂或RNA酶抑制剂 ?还需要举行其他处置惩罚吗 ?操作历程中需要注重什么 ?

细胞裂解需要加?918博天堂酶和RNA酶抑制剂,最好能够举行超声处置惩罚 。另外裂解918博天堂的全程只管在冰上操作 。

 

Q5:lncRNA引物设计有什么注重事项 ?或者说与通俗的引物设计有什么区别 ?

体外转录扩增的引物只需要在正向引物5’端加?T7启动子序列即可 。

 

Q6:质谱判断的918博天堂主要是依据打分来举行筛  ?这个筛选几多分算有用 ?

pull-down富集918博天堂质谱剖析后会剔除不可信918博天堂,交付的都是可信918博天堂,没有明确的打分 。需要排序的话?般是凭证判断918博天堂特征性肽段的数目作为参考 。

 

Q7:做lncRNApull down+质谱?般都会发明多个互作918博天堂对吗 ?怎样选择哪一种918博天堂继续研究下去 ?

差别的RNA团结918博天堂数目不等,凭证现实判断的918博天堂举行筛 ;筛选的原则是凭证自己研究的偏向或相关功效确定这类918博天堂 。



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