DNA pull down 手艺是体外研究DNA与918博天堂质互作的有力工具。该手艺针对目的区域设计特异性DNA探针并经由脱硫生物素标记,标记后探针可以和偶联在磁珠上的链霉亲和素亲和团结,再与总918博天堂提取物举行孵育,有互作的918博天堂质可以和DNA探针特异性团结,形成磁珠-DNA探针-918博天堂复合物,洗涤去除非特异性团结的918博天堂质,再经由洗脱获得目的DNA探针-918博天堂质复合物,最后通过Western Blot或质谱(MS)判断918博天堂质类型。其原理图如1.1:

Q:通过pull-down 后银染验证发明，没有想要的目的条带?

1)有可能是样品被918博天堂酶降解，对应的战略是需要添加918博天堂酶抑制剂，所有操作坚持 4℃以下冰上操作并避免冻融；

2)有可能是加入生物素标记DNA 量缺乏，可以增添生物素标记DNA 量；

3)裂解液盐碱度太高，需用低盐碱度的裂解液；

4)加入细胞裂解液不敷，可以增添细胞裂解量。

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