GST Pull-Down实验基于GST(glutathione-S-transferase),即谷胱甘肽-S-转移酶918博天堂
，可以与谷胱甘肽(Glutathione,GSH)团结,将GSH牢靠于磁珠上,形成GSH-磁珠,将已知918博天堂X与GST融合表达,获得的GST-X918博天堂可与GSH-磁珠团结
，若系统中保存与X918博天堂互做的918博天堂Y,则会形成“磁珠-GSH-GST-X-Y”复合物,与X918博天堂互做的918博天堂即可被疏散并检测。

通过pull-down后WB验证发明,虽然可见目的条带,可是配景很高:

多方面缘故原由造成:

1)实验仪器或试剂被污染,使用清洁的仪器及试剂。

2)转移膜上的目特异吸附导致配景高,实验操作历程中载手套,使用镊子来取,不要接触膜转移面。

3)制备样品中可能有不完全溶释的大的918博天堂复合体,则在制备样品后举行知暂超声处置惩罚(3次,每次5秒钟),然后离心,取上清后举行后续试验。

4)洗涤不彻底,则需要多次洗涤,并设新增添洗涤液中的NaCl和去垢剂浓度。

5)使用了过多的细胞或组织举行裂解导致配景高,则须镌汰样本量,推荐100-500ug细胞裂
解物。

6) 918博天堂降解也可能泛起高配景的情形,只管使用新鲜制备的样品。

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