植物亚细胞定位
- 可视化
- 高区分率
效劳特色
通过与荧光918博天堂融合表达，显示目的918博天堂在细胞中的位置。
效劳先容
亚细胞定位的目的是查找生物大分子在细胞内的详细保存的位置，,融合了GFP的目的918博天堂在扫描共聚焦显微镜的激光照射下，会发出绿色荧光，团结差别细胞器的marker来准确地定位。
效劳优势
- GFP融合918博天堂手艺能够直接视察到目的918博天堂在细胞内的位置和漫衍，无需特另外标记或处置惩罚办法，使得实验效果越发直观和易于明确。
- GFP918博天堂在引发光照射下能够发出强烈的绿色荧光，这使得纵然目的918博天堂在细胞内的表达量较低，也能够被清晰地视察到。
- 与其他可能涉及细胞牢靠、切片等处置惩罚办法的要领相比，GFP融合918博天堂手艺可以在活细胞中举行实时视察，阻止了因处置惩罚历程对细胞造成的损伤和改变。
客户提供
由我司基因合成：
提供918博天堂CDS序列即可。
客户提供模板质粒：
1、客户提供载体/模板：需要提供载体mcs测序报告/模板测序效果，如无测序报告则需另外收取测序用度，由金开瑞代为测序 ；
2、客户提供菌液：菌液量应≥0.5mL，安排一年以上的甘油菌需活化后送样 ；
3、客户提供质粒：质粒量≥5μg ；
4、菌液和液态质粒均需冰袋运输。
最终交付
- 返还目的基因剩余质粒 ；
- 交付5个视野，每个视野包括marker和目的918博天堂的2张荧光图，1张Bright field，1张merge，共4张图 ；
- 结题报告以及所有原始数据。
效劳说明
| 效劳名称 |
效劳内容 |
交付内容及标准 | 效劳周期（事情日） |
| 烟草叶片亚细胞定位 |
质粒提取 |
返还目的基因剩余质粒 | 15 |
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注射烟草 |
包括1个marker | ||
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拍摄照片 |
交付5个视野，每个视野包括marker、目的918博天堂的 2张荧光图，1张Bright field,1张merge,共4张图 |
案例展示
常见问题与剖析 (Q&A)
A: 918博天堂质的N端或C端融合GFP会影响918博天堂质的正常折叠、修饰或定位。N端融合可能会滋扰信号肽的功效，而C端融合可能会影响918博天堂质的加工。选择融合位置时需思量918博天堂质的性子和功效，有时可能需要实验两种方法以确定最佳融合位点。
A: 差别物种或品种的植物细胞在翻译表达基因时，其表达模式和影响因子差别。受物种差别的影响，统一个载体在差别的受体质料中表达的位置可能差别。建议实验时尽可能选用与目的基因泉源相近的受体质料举行表达。
A: 提高转化效率的要领包括优化基因枪或农杆菌介导的转化条件，如粒子的巨细、压力、菌液浓度和共作育时间。另外，使用合适的启动子和增强子也可以增强基因的表达。
A: 918博天堂质可能在差别条件下或发育阶段中具有差别的功效，因此可能保存于多个亚细胞结构中。这可能需要通过进一步的实验，如条件转变下的重复实验或使用特定抑制剂，来验证918博天堂质的动态定位。
相关手艺效劳
| ? 双荧光素酶报告系统 | ? 酵母双杂交 | ? 酵母单杂交 | ? CoIP |
| ? DNA pull-down | ? EMSA | ? CUT&Tag | ? 亚克隆/载体构建 |
| ? RIP-qPCR | ? ChIP-qPCR | ? RNA pulldown | ? 双分子荧光互补（BiFC） |
| ? 荧光素酶918博天堂互补实验（LCA） | |||
相关资源
1、植物亚细胞定位手艺应用
● 918博天堂质功效定位：通过荧光918博天堂标记，确定918博天堂质在细胞内的详细位置，展现其功效和作用机制。
● 信号转导路径剖析：追踪信号分子和信号918博天堂的动态定位，明确植物对外界刺激的响应机制。
● 转录调控研究：定位转录因子和mRNA，探讨基因表达的调控历程。
● 细胞器功效剖析：标记和视察细胞器，相识它们的形态、漫衍及相互作用。
● 发育生物学：视察发育相关918博天堂的定位，研究植物生长和发育的分子基础。
● 应激响应机制：剖析逆境下918博天堂质定位的转变，展现植物的顺应战略。
● 遗传工程验证：在转基因植物中验证基因的表达和定位，确保功效准确表达。
● 代谢途径探索：定位代谢酶，研究代谢物的合成和剖析途径。
2、在学术与应用的双重维度下，植物亚细胞定位手艺不但在基础科学研究中占有焦点职位，还在作物改良、疾病防御、生物手艺等多个领域展现出普遍应用潜力。
以下是一些要害的生运气动及其与亚细胞定位的亲近关联：
● 光相助用：这是植物独吞的能量爆发历程，主要爆发在叶绿体内。叶绿体含有认真捕获光能的色素复合体（如叶绿素）以及执行光相助用化学反应的酶系。例如，光系统II位于叶绿体的类囊体膜上，认真最初的光能捕获和水的光解，而卡尔文循环则在类囊体内举行，将CO2牢靠并转化为糖类。
● 激素信号转导：植物激素如生长素、赤霉素、细胞破碎素等调控着植物生长、发育、应激响应等多个历程。它们的受体和下游信号组件往往定位于特定的细胞器中。例如，生长素受体TIR1位于细胞核中，与生长素团结后调控基因表达 ；而乙烯受体则位于细胞膜，感知乙烯信号后启动一系列胞内反应。
● 代谢途径：植物体内的次生代谢产品，如酚类、萜类等，关于植物防御、吸引传粉者等具有主要作用。这些重大的代谢途径涉及多种酶促反应，这些酶通常在特定的细胞器中协同事情。例如，类黄酮合成途径中的酶漫衍于细胞质、内质网和液泡中，每个酶的特定位置确保了代谢流的高效有序举行。
● 918博天堂质运输与修饰：918博天堂质从合成到成熟的功效状态往往需要经由一系列的修饰和准确运输，这一历程涉及内质网、高尔基体、溶酶体等。例如，内质网是918博天堂质合成和起源折叠的主要场合，之后通过囊泡运输到高尔基体举行进一步的加工和分选，有的918博天堂质最终会被送至液泡贮存，有的则被导向细胞膜或渗透到细胞外。
3、动植物细胞中主要细胞器的异同点比照：
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细胞器 |
动物细胞 | 植物细胞 |
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细胞壁 |
无 | 有，主要由纤维素组成，提供支持和 ； |
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细胞膜 |
有，脂质双层结构 | 有，脂质双层结构 |
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细胞核 |
有，控制细胞运动和遗传信息存储 | 有，控制细胞运动和遗传信息存储 |
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线粒体 |
有，能量爆发中心 | 有，能量爆发中心 |
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内质网 |
有，分为粗面内质网清静滑内质网 | 有，分为粗面内质网清静滑内质网 |
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高尔基体 |
有，认真918博天堂质修饰和包装 | 有，认真918博天堂质修饰和包装 |
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溶酶体 |
有，认真细胞内废物的消化和接纳 | 有，功效类似，但植物中主要依赖液泡举行废物处置惩罚 |
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中心体 |
有，在细胞破碎中起主要作用 | 无，高等植物细胞中不保存，细胞破碎通过其他机制举行 |
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叶绿体 |
无 | 有，仅在光合细胞中保存，认真光相助用 |
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液泡 |
有，但通常较小，功效多样 | 有，成熟植物细胞中有一个或几个大液泡，贮存水、盐分和代谢产品 |
请注重，上述表格中的形貌适用于典范的动植物细胞。然而，细胞的类型和功效多样性意味着某些特化的细胞可能会体现出差别的特征。例如，植物中的根尖细胞可能不含叶绿体，而某些动物细胞如肌肉细胞可能含有大宗的线粒体。别的，低等植物细胞可能含有中心体，这是与高等植物细胞的一个区别。
